Нию чувствительности к антибиотикам, а также На. Определение показаний для оценки антибиотикорезистентности микроорганизмов. Диск с антибиотиком помещается на поверхность питательной среды. При выдаче результатов оценки чувствительности микроорганизмов .
- Определение чувствительности флоры на антибиотики и какие анализы и исследования проводят. Диффузионный метод дисков, которые насыщаются антибиотиками. Применение антисептических средств при этом не рекомендуется.
- Главная / Инструкции по применению / Набор дисков для определения. Определение проводят после посева испытуемых штаммов на агар.
Набор дисков для определения чувствительности к противомикробным препаратам – 1 (НД- ПМП- 1)ТУ 9. Регистрационное удостоверение . Определение проводят после посева испытуемых штаммов на агар Мюллера- Хинтон (АГВ), на поверхность которого наносят различные диски с соответствующими противомикробными лекарственными средствами.
Диаметр зоны учитывают по полному подавлению роста микроорганизмов, определяемому визуально. Диаметры зон измеряют с точностью до 1 мм при помощи штангенциркуля или линейки. Оценку чувствительности микроорганизмов к противомикробному препарату проводят, сопоставляя полученные результаты со значениями таблиц 1 и 2. Меры предосторожности. Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Набор дисков НД- ПМП- 1 предназначен только для in vitro диагностики. Компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. При работе с набором следует соблюдать .
Приготовление питательных сред. Для определения чувствительности рекомендуется использовать агар Мюллера- Хинтон или сухую питательную среду АГВ. Наиболее приемлемым способом контроля качества питательных сред является оценка чувствительности референсных штаммов с последующим сравнением полученных результатов с паспортными данными штаммов. В первую очередь необходимо использовать штамм Pseudomonas aeruginosa АТСС 2.
Среду следует считать удовлетворительной по качеству, если диаметр зоны подавления роста вокруг диска, содержащего 1. Выбор гентамицина для контроля качества связан с тем, что аминогликозидные антибиотики наиболее чувствительны к колебаниям концентрации двухвалентных катионов. Приготовление чашек. Расплавленную среду разливают в стерильные чашки Петри, расположенные на горизонтальной поверхности, в таком объеме, чтобы толщина слоя среды была равна 4,0 . Чашки со средой подсушивают в термостате при температуре + 3. Приготовление инокулята и нанесение его на поверхность агаровой среды.
Инокулят готовят из чистой 1. Концентрацию суспензии из агаровой культуры или бульонной культуры устанавливают по стандарту мутности 0,5 по Мак Фарланду, соответствующему 1,5 х 1. КОЕ/мл. Инокулят сразу после приготовления наносят на поверхность агаровой среды стерильным ватным коммерческим тампоном.
Петри с питательной средой, равномерно распределяют по поверхности покачиванием и удаляют избыток жидкости пипеткой. Чашки с нанесенным инокулятом оставляют при комнатной температуре (+ 1. Нанесение дисков. Диски с помощью пинцета накладывают на поверхность зараженной питательной среды не позднее, чем через 1. Инкубация чашек. Чашки ставят в термостат сразу после нанесения дисков.
Инкубируют в течение 1. Учет результатов. Чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет настольной лампы падал на них под углом 4. Допускается учет результатов в проходящем свете, однако в этом случае отмечается большая субъективность в оценке диаметров зон задержки роста. С помощью штангенциркуля или линейки измеряют диаметр зон задержки роста вокруг дисков со стороны микробного газона, включая диаметр самих дисков, с точностью до одного миллиметра.
При наличии больших колоний по периферии зоны граница ее определяется местоположением внутреннего края этой группы колоний. Наличие таких колоний при отсутствии загрязнения инокулята позволяет предположить наличие гетерорезистентной популяции. При определении чувствительности к некоторым антибиотикам роящихся штаммов протея зона задержки роста может быть затянута тонкой вуалеобразной пленкой, которая обычно не мешает установлению границы зоны задержки роста.
Интерпретация полученных результатов. Оценку результатов проводят по таблицам 1 и 2, которые содержат пограничные значения диаметров зон подавления роста для устойчивых, промежуточных и чувствительных штаммов. К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз противомикробных препаратов.
К промежуточным относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата. Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз. Таблица 1. Интерпретация значений диаметров зон подавления роста при определении чувствительности к противомикробным препаратам микроорганизмов с обычными питательными потребностями. Наименование дисков с препаратами.
Содежание препарата в диске, мкг. Среда. Диаметры зон для культур, мм. Устойчивых. Промежуточных. Чувствительных. 12. Азитромицин. 15. 1*. Россия, Смоленск, ул. Крупской, 2. 8, а/я 5).
Таблица 2. Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении чувствительности к противомикробным препаратам микроорганизмов со сложными питательными потребностями. Наименование дисков с препаратами. Содежание препарата в диске, мкг.
Среда. Диаметры зон для культур, мм. Устойчивых. Промежуточных. Чувствительных. 12. Азитромициндля Streptococcus spp. Haemophilus spp. 1. Допустимые пределы значений диаметров зон подавления роста контрольных штаммов микроорганизмов. Противомикробный препарат.
Содержание в диске, мкг. Среда. Диаметры зон подавления роста контрольных культур, мм. Staphylococcusaureus. ATCC 2. 59. 23. Escherichiaсoli.
ATCC2. 59. 22. Pseudomonasaeruginosa. ATCC2. 78. 53. Escherichiaсoli.
ATCC3. 52. 18. Enterococcusfaecalis. АТСС2. 92. 12. 23. Азитромицин. 15. 1*2.
Амикацин. 30. 12. Амоксициллин. 25. Амоксицилин/клавуланат.
Ампициллин. 10. 12. Ампициллин/сульбактам. Бензилпенициллин. Ванкомицин. 30. 11. Гентамицин. 10. 11.
Гентамицин. 12. 01- -- -1. Доксициклин 3. 01.
Имипенем 1. 01- 2. Канамицин 3. 01. 19- 2. Карбенициллин 2. 52*- 2.
Карбенициллин 1. 00. Кларитромицин. 15. Клиндамицин 2. 12. Левомицетин 3. 01. Левофлоксацин 5. 12. Линезолид 3. 01. 25- 3. Линкомицин 1. 51.
Ломефлоксацин 1. 01. Меропенем 1. 01. 29- 3. Моксифлоксацин 5.
Налидиксовая кислота 3. Неомицин 3. 02. 22- 2. Нетилмицин 3. 01. Норфлоксацин 1. 01.
Оксациллин 1. 11. Оксациллин 5. 12. Оксациллин. 10. 22. Олеандомицин 1. 52. Офлоксацин 5. 12. Пефлоксацин 5. 12.
Рифампицин 5. 12. Рокситромицин. 30. Спарфлоксацин 5. 12. Стрептомицин. 10. Стрептомицин 3. 00. Тетрациклин 3. 01. Тикарциллин/клавуланат 7.
Тобрамицин 1. 01. Триметоприм/сульфаметоксазол. Фосфомицин 2. 00. Фузидин 1. 01. 29- 3. Фурагин 3. 00. 22. Фурадонин 3. 00. 11. Фуразолидон 3. 00.
Цефазолин 3. 01. 29- 3. Цефалексин 3. 02. Цефамандол 3. 01.
Цефепим 3. 01. 23- 2. Цефиксим 5. 1- 2. Цефокситин 3. 01.
Цефоперазон 7. 51. Цефотаксим 3. 01. Цефтазидим 3. 01. Цефтибутен 3. 01- 2. Цефтриаксон 3. 01. Цефуроксим 3. 01. Ципрофлоксацин 5.
Эритромицин. 15. 12. Примечание: *1 - среда Мюллера- Хинтон согласно Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2. Comite de l'Antibiogramme de la Societe Francaise de Microbiologie (CA- SFM, 2. МУК 4. 1. 2. 1. 89. Министерства здравоохранения России (2. АГВ согласно методическим рекомендациям Комитета по здравоохранению Правительства Санкт- Петербурга и Санкт- Петербургского медицинского информационно- аналитического центра (2.
Мюллера- Хинтон с добавлением глюкозо- 6- фосфата до концентрации 2. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2. МУК 4. 1. 2. 1. 89. Министерства здравоохранения России (2. При определении чувствительности Pseudomonas aeruginosa (в том числе контрольного штамма) к ципрофлоксацину и норфлоксацину на среде АГВ зоны задержки роста значительно отличаются от таковых, получаемых на агаре Мюллера- Хинтон.
Поэтому среда АГВ не может быть использована для определения чувствительности синегнойной палочки к этим антибиотикам. Условия хранения и эксплуатации.
Набор дисков НД- ПМП- 1 следует хранить при температуре + 2 - 8 . Допускается хранение набора при температуре до 2. Мира, 1. 4; тел./факс: (8.
Вопросы стандартизации исследований / Клиническая микробиология / Русский Медицинский Сервер. Авторы: Сидоренко С.
В., Колупаев В. Е. Брошюра публикуется с незначительными сокращениями Введение. Антимикробная терапия сыграла решающую роль в лечении инфекционных. ХХ веке, так как благодаря использованию антибиотиков. Со. времени открытия пенициллина в 2.
Вместе с тем, использование антибиотиков не оказало существенного влияния на. Нерациональное применение. Вследствие этого, участились случаи неудач при. Различают естественную (природную) и приобретенную устойчивость. Приобретенная устойчивость вначале формируется у. Генетические механизмы формирования устойчивости связаны либо с мутациями в.
Детерминанты резистентности могут на хромосомах, так и на. Известны пять основных биохимических механизмов устойчивости: Недостаточная проницаемость клеточной стенки микроорганизма. Изменение или элиминация мишени действия антибиотика.
Развитие микроорганизмом альтернативных ферментативных путей, которые. Разрушение или инактивация препарата. Активное выведение антибиотика из микробной клетки. Появление все большего числа новых антибиотиков и увеличение числа штаммов с.
Наиболее. принципиальные изменения в методологии оценки антибиотикорезистентности и. Без учета перечисленных фактов в настоящее время невозможно получение. Основной целью исследований антибиотикорезистентности является выявление. Подтверждение наличия у. Проведение исследований по оценке антибиотикорезистентности (определение.
Обоснования назначения оптимальной индивидуальной антибиотикотерапии для. Обоснования эмпирической антибиотикотерапии для отдельных нозологических. Исследованию подлежат как микроорганизмы, выделенные из патологического. Этапы проведения исследования по оценке антибиотикорезистентности приведены.
Оценка целесообразности изучения антибиотикорезистентности выделенного. Выбор методов проведения исследования и контроля качества 3. Выбор антибактериальных препаратов, подлежащих включению в исследование. Определение показаний для проведения исследований.
Исследования антибиотикорезистентности показаны, если уровень устойчивости. Исследованию по оценке антибиотикорезистентности подлежат чистые культуры. Исследовать в практических целях микроорганизмы, для которых методы изучения. Данные. полученные при исследовании чувствительности, таких микроорганизмов не могут.
С крайней осторожностью следует также оценивать факты. Полученные штаммы рекомендуется. Определение показаний для оценки антибиотикорезистентности микроорганизмов. Обязательному исследованию на антибиотикорезистентность подлежат все. Следует уделять внимание изучению антибиотикорезистентности микроорганизмов.
Микроорганизмы, проявляющие универсальную чувствительность к каким- либо. Streptococcus pyogenes – все штаммы чувствительны к пенициллину. Диско- диффузионный метод оценки антибиотикочувствительности. Принцип метода. Принцип диско- диффузионного метода (по Keurby- Bauer) основан на феномене. Градиент концентрации антибиотика в. Диск с антибиотиком помещается на поверхность.
При этом практически одновременно начинаются два процесса. С. практической точки зрения важно то, что от диска к периферии происходит. МПК в отношении. исследуемого микроорганизма. Особенностью роста микроорганизмов на питательных средах является наличие. По окончании лаг- фазы рост культуры исследуемого. Таким образом, чем длиннее лаг- фаза у. Диско- диффузионный метод в настоящее время.
Учитывая закономерности зонообразования очевидно, что для получения с. Приготовление и состав питательной среды Приготовление суспензии исследуемого микроорганизма заданной.
Минимизация интервала времени между инокуляцией микроорганизма и. Соблюдение температурного и временного режима инкубации. Методика проведения исследования. Приготовление питательной среды Мюллера Хинтона Агаровая среда Мюллера Хинтона представляет собой стандартную питательную. ВОЗ. Концентрация тимидина . Приложение 1) : в чашках Петри, готовых к использованию, с добавками для роста.
При приготовлении питательной среды в лабораторных условиях необходимо. Петри. Перед заполнением расплавленной средой чашки Петри устанавливают на строго. Соблюдение указанных предосторожностей.
После заполнения чашки оставляют при комнатной температуре для застывания. Хранить чашки можно запаянными в полиэтиленовые пакеты при +4 – +8. При использовании чашек после хранения в холодильнике их. Перед инокуляцией необходимо проконтролировать отсутствие конденсата. Контроль качества питательной среды. Наиболее приемлемым для практических лабораторий способом контроля качества.
Среду следует считать удовлетворительной по качеству, если диаметр. Выбор гентамицина для контроля качества связан с тем. Для контроля среды на наличие антагонистов сульфаниламидных препаратов и. Enterococcus faecalis ATCC. При величине зоны ингибиции вокруг диска, содержащего 1.
N. B. Количественная оценка при интерпретация зон подавления роста, основанная на. Мюллера Хинтона, не всегда применима к другим средам. АГВ. Диски с антибиотиками.
Диски выпускаются фирмами- производителями (в частности фирмой bio. Merieux*) в. стандартной упаковке (см. Приложение 1) с 5. Упаковки удобны для пользователя, герметичны, содержат.
Диаметр дисков, согласно рекомендациям ВОЗ, составляет 6,3. На каждый. диск нанесена аббревиатура, состоящая из 1, 2 или 3 букв. Хранить диски. необходимо в сухом месте при + 2- 8.
Приготовление материала для инокуляции и посев. Для приготовления инокулята используют 1. Суспензию из. агаровой культуры или бульонную культуру доводят до мутности стандарта 0. Mc. Farland и разводят еще в 1. КОЕ/мл). Для стандартизации.
Приготовленный таким образом инокулят наносят в количестве 1 – 2 мл на. Петри с питательной средой, равномерно распределяют по. Приоткрытые. чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 1. Однако более практичным способом инокуляции является использование.
Тампон необходимо погрузить в. Инокуляцию на поверхность агаровой среды проводят штриховыми. Петри на 6. 0. Аппликация дисков. Разместить диски с соответствующими антибиотиками на поверхности агара.
Так, расположенные на расстоянии больше. При расположении их на более. Синергизм (несимметричные зоны) могут также наблюдаться в. Для обеспечения хорошей постоянной диффузии антибиотика плотно прижать. Оптимизировать стадию аппликации можно с помощью диспенсеров. Оценка результатов. После окончания инкубации чашки помещают кверху дном на темную матовую.
Диаметр зон задержки роста с учетом диаметра. При измерении зон задержки роста следует. Не следует обращать. Крупные колонии, выявляемые в пределах четкой зоны ингибиции. При оценке антибиотикорезистентности роящихся штаммов протея, зона задержки. При оценке резистентности к сульфаниламидам и их комбинации с триметопримом.
Это связано с тем, что под действием этих препаратов перед полной. В отличие от описанного выше метода учета результатов, при оценке. Для интерпретации полученных результатов используют таблицы, в которых. При отнесении штамма к категории “чувствительный” предполагается, что. При отнесении штамма к категории “промежуточный” предполагается, что. При отнесении штамма к категории “резистентный” предполагается, что. Поскольку диаметр зоны ингибиции роста исследуемого микроорганизма.
МПК антибиотика, каждому пороговому значению МПК. Необходимо обратить внимание на то, что для различных микроорганизмов. Рекомендации по подбору антибиотиков для включения в исследование.
Общие рекомендации. Основой для выбора антибактериальных препаратов, подлежащих включению в. В исследование целесообразно включать антибактериальные препараты. Антибиотики разделены на две группы: подлежащие изучению в первую очередь.
А) и дополнительные (группа В). Формирование стандартных наборов. Кроме спектра микробиологической активности препаратов, необходимо учитывать.
Необходимо учитывать. Оценка антибиотикорезистентности Enterobacteriaceae. Представители семейства Enterobacteriaceae являются одними из ведущих. Для. них характерно крайнее разнообразие возможных механизмов резистентности к.
Целесообразность формирования отдельного набора для изучения. Enterobacteriaceae. Набор для определения резистограммы представителей семейства. Enterobacteriaceae следует формировать, учитывая тот факт, что их. Это позволяет в значительной части случаев.
Самостоятельные наборы антибиотиков следует использовать для определения. Shigella, Salmonella, Escherichia). Необходимость такого разделения связана с особенностями фармакокинетики. Из практических соображений набор антибиотиков для оценки резистентности. Учитывая этот факт. Оценка антибиотикорезистентности Enterobacteriaceae: возбудителей.
А) Препараты первого ряда Основу лечения гнойно- воспалительных заболеваний, вызываемых представителями. Enterobacteriaceae, в настоящее время составляют b- лактамные. Однако для этих микроорганизмов характерно широкое. Препаратами альтернативными b- лактамам являются аминогликозиды и. В первую очередь в исследование необходимо включать: аминопенициллины; комбинированные препараты на основе полусинтетических пенициллинов и. I или II поколения; цефалоспорины III поколений; аминогликозид (наиболее целесообразно гентамицин); фторхинолон. Выбор цефалоспоринов I или II поколений должен определяться.
При изучении. антибиотикорезистентности Enterobacteriaceae – возбудителей госпитальных. Руководство По Эксплуатации Mitsubishi Pajero. I – II поколений. Б) Дополнительные препараты Включение в набор для исследования дополнительных антибиотиков, прежде. При подборе антибиотиков для лечения инфекций легкой и средней степеней. В случае тяжелых, крайне тяжелых и, особенно, госпитальных инфекций в. IV поколения, уреидопенициллины, комбинированные препараты. Особое внимание следует уделять интерпретации результатов оценки.
Полученные результаты необходимо сопоставлять с. К цефалоспоринам I поколения из энтеробактерий природной. E. coli, P. Несмотря на наличие у. Salmonella spp. Цефалоспорины II поколения обладают более широким спектром активности. Klebsiella spp., активность в отношении микроорганизмов группы. Enterobacter spp, Citrobacter spp., Serratia spp.
Такой фенотип чаще всего связан с продукцией.